cultura Staphylococcus aureus

cultura Staphylococcus aureus

Per distinguere le caratteristiche di crescita di microrganismi in vari differenziali, selettivi e mezzi arricchito.

Gran parte dello studio dei microrganismi dipende dalla sua capacità di crescere in laboratorio, e questo è possibile solo se idonei terreni di coltura sono quelle disponibili per la crescita del microrganismo. Un mezzo di coltura è definito come un preparato solido o liquido utilizzato per la crescita, trasporto e stoccaggio di microrganismi. Il mezzo di coltura efficace deve contenere tutti i nutrienti necessari per la crescita del microrganismo.

media specializzati sono ampiamente utilizzati per l’isolamento e l’identificazione dei microrganismi, testare la sensibilità agli antibiotici, l’analisi di acqua e cibo, microbiologia industriale, e altre attività. Anche se tutti i microrganismi hanno bisogno di fonti di energia, azoto, carbonio, fosforo, zolfo, e vari minerali, l’esatta composizione di un mezzo soddisfacente si avvarrà della specie si cerca di individuare e coltivare perché esigenze nutrizionali variano così notevolmente tra i microrganismi.

La conoscenza dell’habitat normale del microrganismo è spesso utile nella scelta di un terreno di coltura adatto, perché le sue esigenze nutrizionali riflettono il suo ambiente naturale. Un mezzo viene utilizzato per selezionare e crescere microrganismi specifici o per aiutare a identificare una particolare specie. In questi casi, la funzione del mezzo dipende anche dalla sua composizione. Oltre ai nutrienti necessari per la crescita di tutti i batteri, supporti per scopi speciali contengono uno o più composti chimici che sono essenziali per la loro specificità funzionale.

Questi includono: Selettivo, differenziale e Enriched Media.

terreni selettivi :

Per esempio. Mannitol Salt Agar, Hektoen enterica agar (HE), Phenylethyl alcol agar

supporti differenziale:

mezzi differenziali sono ampiamente utilizzati per differenziare organismi o gruppi di organismi strettamente correlati. A causa della presenza di certi coloranti o di sostanze chimiche nei media, gli organismi producono certi cambiamenti caratteristici o modelli di crescita che vengono utilizzati per l’identificazione o la differenziazione di microrganismo.

Per esempio. Mac Conkey (MCK) agar, Eosina blu di metilene (EMB) agar

mezzi arricchito :

mezzi arricchiti sono i media che sono state integrate con materiali altamente nutrienti come il sangue, siero o estratto di lievito con lo scopo di coltivare microrganismi esigenti.

Per esempio. agar sangue, agar cioccolato

Alcuni dei supporti speciali sono i seguenti:

1. Mannitol Salt Agar (MSA):

Mannitolo agar sale è sia un supporto selettivo e differenziale usato per l’isolamento di patogeni stafilococchi da colture miste.

componenti:

  • 7.5% NaCl – Seleziona per le specie di Staphylococcus. Questa concentrazione di sale è troppo elevata per la maggior parte altri batteri per resistere e. Pertanto, inibisce la loro crescita.
  • mannitolo – Alcool del mannosio carboidrati. Mannitolo fermentazione produce prodotti finali acidi che trasformano il colore giallo di media. Il giallo indica mannitolo positivo e nessun cambiamento di colore indica mannitolo negativo.
  • indicatore di pH rosso fenolo – Giallo a pH acido (Lo stesso indicatore che viene utilizzato in brodi fenolo carboidrati rosso fermentazione).

Figura 1. Mannitol Salt Agar

Formula:

Ingredienti per litro di acqua deionizzata

2. di MacConkey Agar (MAC):

Agar di MacConkey è al tempo stesso un supporto selettivo e differenziale; è selettivo per i batteri Gram negativi e in grado di differenziare i batteri che hanno la capacità di fermentare il lattosio.

componenti:

  • Sali biliari – Inibisce maggior parte dei batteri Gram-positivi, ad eccezione Enterococcus e alcune specie di Staphylococcus aureus cioè Staphylococcus.
  • tintura di cristallo viola – Inibisce alcuni batteri Gram-positivi selezionando quindi per Gram negativi.
  • Lattosio – Alcuni batteri possono fermentare il lattosio prodotti acido-end, gli altri non possono.
  • pH neutro indicatore rosso – Macchie microbi fermentazione del lattosio

* Rosa caldo a pH acido
* Rosa in pH neutro
* Tan a pH alcalino

  • peptone – una fonte di proteine, aminoacidi per la crescita microbica.

Figura 2. MacConkeys Agar

Utilizzando il lattosio disponibile a medio, Lac + batteri (lattosio positivi) come Escherichia coli, Enterobacter e Klebsiella produrrà acido nel mezzo, che abbassa il pH della agar sotto 6.8 e provoca la comparsa di colonie rosse o rosa. I sali biliari nel mezzo precipitano nelle immediate vicinanze della colonia, causando mezzo circostante la colonia di diventare aspetto torbido. Non lattosio fermentazione batteri come, specie Proteus ,Salmonella. Pseudomonas aeruginosa e Shigella non può utilizzare il lattosio nel mezzo, e userà peptone invece. Ciò provoca la formazione di ammoniaca, che aumenta il pH del agar, e porta alla formazione di colonie bianche o incolori nella piastra. Ma, in alcuni casi, possono anche guardare dorato al marrone con centri scuro. Essi sono di solito colonie circolari e disposti in modo casuale.

Formula:

Ingredienti per litro di acqua deionizzata

3. Eosin blu di metilene (EMB) Agar (Levine):

Eosina metilene agar blu (EMB) è sia un terreno selettivo e differenziale usato per la rilevazione e l’isolamento di patogeni intestinali Gram-negativi.

componenti:

  • Lattosio – Un disaccaride che può essere fermentato da alcuni enzimi batterici per produrre prodotti finali acidi.
  • Eosina e blu di metilene – Queste sono coloranti che inibiscono la crescita della maggior parte dei batteri Gram-positivi. Essi reagiscono anche con prodotti acidi risultato di fermentazione del lattosio per colorare le colonie.

Figura 3: inoculato EMB piastra di agar

Produzione di acido dalla fermentazione del lattosio provoca la precipitazione dei coloranti sulla superficie della colonia conseguente diversi colori.

  • Grandi quantità di acido → lucentezza metallica verde
  • Piccole quantità di acido → rosa
  • No fermentazione → incolore

Enterobacter aerogenes produce grandi colonie, che sono di colore rosa-a-appassionato intorno a centri scuri. Escherichia coli produrre piccole colonie scuri con una lucentezza metallica verde. Pseudomonas, Proteus, Salmonella e Shigella sp produce colonie incolori perché non fermenta lattosio.

Formula:

Ingredienti per litro di acqua deionizzata

4. Phenylethyl Alcohol Agar:

Phenylethyl alcol (PEA) Agar con o senza 5% di sangue di pecora è un terreno selettivo per l’isolamento di organismi gram-positivi, cocchi gram-positivi particolare, da campioni di flora gram-positivi e gram-negativi misti.

Componente:

  • Phenylethyl alcol – Inibisce la crescita di Gram negativi in ​​quanto selettivamente e reversibilmente inibisce la sintesi del DNA, selezionando quindi per Gram positivi.

Figura 4: inoculato PEA Agar

Formula:-

Ingredienti per litro di acqua deionizzata

5. Hektoen enterica (HE) Agar:

Hektoen enterica (HE) Agar è un terreno moderatamente selettivi utilizzati in procedure qualitative per l’isolamento e la coltura di microrganismi enterici gram-negativi, in particolare Shigella e Salmonella da una varietà di campioni clinici e non clinici.

componenti:

  • Sali biliari. Inibisce la crescita di molti organismi Gram-positivi.
  • Bromotimolo blu e acidi coloranti Füchsin. avere una tossicità inferiore a quella di molti altri mezzi enterici, con conseguente migliore recupero.
  • Lattosio, saccarosio, e salicina. fornire carboidrati fermentabili per incoraggiare la crescita e la differenziazione delle enterics.
  • tiosolfato di sodio. fornisce una fonte di zolfo.
  • citrato ammonico ferrico. fornisce una fonte di ferro che permette la produzione di solfuro di idrogeno da tiosolfato di sodio, che fornisce una fonte di zolfo. Ciò consente anche la visualizzazione di produzione di idrogeno solforato facendo reagire con idrogeno solforato per formare un precipitato nero.

Figura 5: piatto inoculato Hektoen Enteric Agar

Coliformi capace di superare la qualità moderatamente inibitori dei mezzi di comunicazione si svilupperà in colonie arancio o rosa salmone in presenza dell’indicatore blu bromotimolo. Shigella specie si sviluppano in colonie di colore verde scuro a centri di blu-verde. Salmonella specie appaiono come colonie blu-verde con o senza centro nero. I produttori di H2 S formerà colonie nere centrato in presenza dell’indicatore citrato ferrico ammonico.

Formula:

Ingredienti per litro di acqua deionizzata

6. Blood Agar:

agar sangue è sia differenziale e medie arricchito. Il sangue che è incorporato in questo mezzo è un ingrediente arricchimento per la coltivazione di microrganismi esigenti come la Streptococco specie.

Un certo numero di specie di streptococchi producono sostanze che distruggono i globuli rossi; cioè, essi provocano lisi della parete cellulare rosso con successivo rilascio di emoglobina. Tali sostanze sono indicati come hemolysins. L’attività di hemolysins streptococco noto anche come streptolisina può essere facilmente osservata quando gli organismi sono in crescita su una piastra di agar sangue.

Diverso streptococchi produrre effetti diversi sui globuli rossi in agar sangue. Coloro che producono emolisi incompleta e la distruzione parziale delle celle intorno colonie sono chiamati alfa-emolitico Streptococchi. Tipicamente, questo tipo di emolisi è visto come un inverdimento distinta del agar nella zona emolitica, e quindi questo gruppo di streptoc OCCI è stato anche indicato come il gruppo viridans.

Alcune specie di streptococchi non producono hemolysins. Pertanto, quando le loro colonie crescono su agar sangue, nessun cambiamento è visto nei globuli rossi intorno a loro. Queste specie sono indicati come non emolitici o gamma streptococchi emolitica.

Su agar sangue, S. aureus di solito mostra una luce per il pigmento giallo dorato, mentre S.epidermidis ha un pigmento bianco e S.saprophyticus o un brillante pigmento giallo o bianco. Tuttavia, la pigmentazione non è sempre una caratteristica affidabile. Su agar sangue, S.aureus di solito, ma non sempre, beta-emolitico; S. epidermidis e S. saprophyticus sono quasi sempre non emolitici.

Formula:

Ingredienti per litro di acqua deionizzata

Nota: Sciogliere gli ingredienti e autoclave di cui sopra. Raffreddare la base agar sangue sterile a 45 ° a 50 ° C e aggiungere asetticamente 50 ml di soluzione sterile sangue defibrinato. Mescolare accuratamente e poi erogare in lastre, mentre un liquido. Sangue base di agar per la fabbricazione di agar sangue può anche essere acquistato. Una combinazione di emoglobina e un integratore nutritivo commerciale può essere utilizzato al posto del sangue defibrinato.

7.Chocolate Agar:

Figura 7: non inoculato agar cioccolato Piastra

Lisi del sangue con i rilasci di calore il fattore X che altrimenti isnt disponibili in regolari piastre di agar sangue. Questo è il motivo per cui il cioccolato agar è il supporto ideale per la coltura Haemophilus influenzae.

Il fattore V è un coenzima termolabile (nicotinamide adenina dinucleotide, o NAD), fondamentale nel metabolismo di alcune specie che mancano esso. Estratti di lievito contengono fattore V e sono uno dei più convenienti supplementi di agar cioccolato o altri supporti utilizzati per Haemophilus.
Agar cioccolato, tuttavia, non rivela i dati emolisi, in modo che la differenziazione delle specie tra i membri Haemophilus deve essere effettuato in un altro modo.

Formula:

Ingredienti per litro di acqua deionizzata.

Nota: Aggiungere asetticamente 5% sterili, il sangue defibrinato di montone per l’agar sterile e fuso. Riscaldare a 80 ° C per 15 minuti o fino ad un colore del cioccolato sviluppa.

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